臭氧作为一种强氧化剂、消毒剂、精化剂、催化剂等被广泛应用于水处理，医药卫生，石油化工，食品等多种领域，据资料记载，已有上百年的历史。欧美、日本、法国、德国、加拿大等国家自来中应用臭氧已达到普及程度，目前国际上在医药方面应用更是广泛，近年来国内已逐步应用和推广，特别是用于禽舍消毒防病方面有所突破。本试验是我们根据臭氧在禽病防治应用的情况进行设计并实施的。针对我们多年来对禽病发生的情况，选用了致病性较强的大肠杆菌、葡萄球菌和白色念珠菌进行了杀菌试验，杀菌效果报告如下：
一、试验材料
1、仪器高压蒸汽灭菌器、灭菌锥形瓶(300m L)、灭菌试管(10m L)、灭菌培养皿(9cm)、灭菌移液器接嘴(100m L、1000m L)、微量移液器(10—100m L、100～1000m L)接种环、酒精灯、超净工作台、恒温数控培养箱(37℃)、臭氧发生器：型号，FQ一30 1；额定电压200／50H z；功率，7w；臭氧量，200～300m g／h、臭氧检测仪：型号，LIM ICEN OZ ON E M ETE R。
2、试剂营养琼脂培养基、血液琼脂培养基、营养肉汤培养基、血液肉汤培养基、灭菌生理盐水。
3、菌群大肠埃希氏菌，CM CC 44 102—3a8；金黄色葡萄球菌，C M C C 26003—5a10；白色念珠菌，C M C C988001—2a2；菌种由天一科技有限公司提供。
二、试验方法
1、制备培养基按培养基制作规定进行。
2、繁殖茼种将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌菌种分别接种营养肉汤、血液肉汤培养基37℃24～72h培养复苏。用复苏菌液接种营养琼脂培养基、血液琼脂培养基培养进行菌落形态观察，涂片，革兰氏染色镜检，检查菌种纯度。
3、繁殖茵液将纯检的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌菌种分别接种营养肉汤、血液肉汤培养基37℃24～72h培养，得到繁殖菌液。
4、杀茵处理见表1，每种菌14个处理，1个对照。
◎、稀释液配制菌种冻干粉稀释后接种血琼脂平板，37℃24h(或72h)培养，平板表面菌落加lm L灭菌生理盐水，用灭菌接种环局部混合形成金黄色葡萄球菌悬液。给灭菌三角瓶中加生理盐水200m L，无菌操作加入上述菌液5环，混合均匀为稀释菌液。
◎、臭氧水中杀菌实验无菌操作，将连接臭氧发生器的灭菌胶管伸入稀释菌液底部，打开臭氧发生器开始杀菌实验，同时开始计时，当达到设定灭菌时长时，取实验菌液接种涂布血液琼脂平板。每时刻接种0．01m L接种液，用接种环在平板表面涂布均匀，标记，37℃24h(72h)培养。试验开始前先制备菌液空白对照平板接种0.01m L。
◎、臭氧气体杀菌试验无菌操作，取稀释菌液接种血液琼脂平板，每平板接种量分别为0.01m L、0.02m L，用接种环在平板表面涂布均匀。将臭氧发生器的胶管伸人约O．8m的较密闭消毒空间内，打开臭氧发生器，空间内充入臭氧5m in后，将试验菌液接种涂布血液琼脂平板置入消毒空间，同时开始计时，当达到设定灭菌时长时，取出平板，标记。37℃24h(或72h)培养。同时制备菌液空白对照平板2个(0．01m L、0．02m L)。试验平板经37C24h(或72h)培养。在显微镜下进行平板菌落计数。并计算不同臭氧处理的杀菌效果(杀菌率)。http://www.zhenghang88.com
